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论著·基础研究 | 更新时间:2018-11-02
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粉尘螨变应原第2组分血清特异性IgE酶联免疫吸附测定法的建立及其检测效能的评价

广西医学 2018第40卷19期 页码:2307-2310

作者机构:江苏医药职业学院基础医学部;江苏省无锡市人民医院临床实验室

基金信息:【基金】国家自然科学基金(NSFC31272369);江苏省自然科学基金面上项目(BK20151292);江苏省卫生厅职业技术教育研究立项课题(JZ201304);盐城市医学科技发展计划(YK2016047,YK2016050)

DOI:10.11675/j.issn.0253-4304.2018.19.16

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目的 建立粉尘螨变应原第2组分(Der f 2)血清特异性IgE的酶联免疫吸附测定(ELISA)法,并评价其检测效能。方法 利用重组表达的Der f 2作为包被抗原,分别建立检测Der f 2血清特异性IgE的间接ELISA法和亲和素-生物素复合(ABC)-ELISA法,采用正交试验筛选两种方法的最优检测条件。分别采用上述两种ELISA法检测Der f 2特异性IgE阳性标准血清,绘制两种ELISA法检测Der f 2特异性IgE的标准曲线;同时以Pharmacia UniCap系统检测结果为金标准,计算两种ELISA法检测46例哮喘患者血清Der f 2特异性IgE的结果符合率。结果 间接ELISA法检测Der f 2特异性IgE的最佳条件为:包被液浓度为10 μg/ml,血清稀释倍数为1 ∶5,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗人IgE抗体稀释倍数为1 ∶1 000。ABC-ELISA法检测Der f 2特异性IgE的最佳条件为:包被液浓度为15 μg/ml,血清稀释倍数为1 ∶5,生物素标记抗人IgE抗体稀释倍数为1 ∶1 000,HRP标记的链霉和素稀释倍数为1 ∶2 000。间接ELISA和ABC-ELISA法的灵敏度值分别为0.72 U/ml和0.69 U/ml。间接ELISA和ABC-ELISA检测哮喘患者的符合率分别为93.5%和95.7%。结论 成功建立基于重组表达Der f 2的ELISA法,其对Der f 2特异性IgE具有较好的检测效能。

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