目的 构建并鉴定过表达三突变型低氧诱导因子1α（HIF-1α）重组人脐静脉内皮细胞株EA.hy926。方法 根据原有质粒pcDNA3.1+-HIF1-Ala402-Ala564-Ala803的HIF-1α三突变基因序列设计引物，经PCR扩增后连接至入门载体，将含有目的基因的入门载体与pT590质粒及pENTR_L4_PCMV_R1质粒拼接为三突变型HIF-1α重组慢病毒载体，将该载体转化至DH5α感受态细胞，挑选阳性的克隆测序鉴定。将三突变型HIF-1α重组慢病毒载体与辅助包装质粒共转染人胚肾细胞系HEK293T细胞，收集病毒液。将EA.hy926细胞分为感染重组HIF-1α过表达慢病毒的Lenti-HIF-1α组、感染阴性对照慢病毒的Lenti-negative组、只加培养基的MOCK组，给予相应干预后采用嘌呤霉素（1 μg/ml）筛选高表达HIF-1α细胞株，观察病毒感染效率，采用蛋白免疫印迹法分析HIF-1α蛋白表达情况。结果 测序鉴定结果提示成功合成三突变型HIF-1α重组质粒。荧光显微镜下观察到HEK293T细胞中有大量增强绿色荧光蛋白（EGFP）表达。重组慢病毒感染EA.hy926细胞后，荧光显微镜下可见大量EGFP表达，Lenti-HIF-1α 组细胞稳定表达HIF-1α蛋白，且其表达水平高于Lenti-negative组及MOCK组。结论 重组三突变型HIF-1α慢病毒过表达载体可成功构建，并可获得稳定表达HIF-1α的人脐静脉内皮细胞株。