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论著·基础研究 | 更新时间:2018-06-13
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小干扰RNA沉默尿激酶型纤溶酶原激活物受体和组织蛋白酶B基因对肝癌细胞迁移的影响及其机制

广西医学 2018第40卷10期 页码:1186-1191

作者机构:广西医科大学第一附属医院检验科;广西医科大学第一附属医院消化内科

基金信息:【基金】国家自然科学基金(81560447,81460114);广西科学研究与技术开发计划(桂科攻1355005-3-2);广西自然科学基金(2012GXNSFAA053143)

DOI:10.11675/j.issn.0253-4304.2018.10.20

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目的 探讨小干扰RNA(siRNA)沉默尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)和组织蛋白酶B(CB)基因对肝癌细胞迁移的影响及其机制。方法 培养肝癌SMMC-7721细胞后,用荧光标记的低、中、高浓度的siRNA转染肝癌细胞,在荧光显微镜下计算siRNA转染效率,筛选出最佳siRNA转染浓度。将肝癌细胞分成空白对照组、阴性对照组(LC 组)、uPAR-siRNA转染组(si-uPAR组)、CB-siRNA转染组(si-CB组)和uPAR-siRNA/CB-siRNA联合转染组(si-UC组)。si-uPAR组、si-CB组、si-UC组细胞分别加入uPAR-siRNA、CB-siRNA、uPAR-siRNA/CB-siRNA转染试剂复合物进行转染,LC 组仅加入转染试剂,空白对照组不进行干预。转染72 h后通过细胞划痕实验检测癌细胞迁移能力;转染48 h后,用流式细胞术分析细胞周期,实时荧光定量PCR法检测各组肝癌细胞整合素α6和基质金属蛋白酶9(MMP9)基因表达水平。结果 24 h后,用荧光标记的低浓度的siRNA转染肝癌细胞其转染效率在85%以上,细胞状态良好。与空白对照组及LC组相比,si-uPAR组、si-CB组、si-UC组细胞的迁移能力均下降、G0/G1期细胞比例增加、整合素α6及MMP9 mRNA表达水平均降低(均P<0.05);与si-uPAR组、si-CB组相比,si-UC组细胞的迁移能力均下降、G0/G1期细胞比例增加、整合素α6及MMP9 mRNA表达水平均降低(均P<0.05)。结论 siRNA沉默uPAR或CB基因均可抑制肝癌细胞的迁移,且联合沉默抑制效果更明显,其可能通过抑制整合素α6和MMP9 mRNA的表达、诱导细胞G0/G1期阻滞而发挥作用。

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