目的 构建过表达和敲除沉默信息调节蛋白6（SIRT6）基因质粒，并筛选过表达和敲除稳定肺癌A549细胞株。方法 采用PCR技术扩增SIRT6基因序列，通过中间质粒pSK连接在慢病毒质粒CD513B上，鉴定正确后进行慢病毒包装，收集含慢病毒颗粒的上清感染A549细胞，加入嘌呤霉素筛选出过表达SIRT6基因的稳定细胞株，蛋白质印迹法检测细胞SIRT6蛋白表达水平。利用规律成簇间隔短回重复/Cas9基因编辑技术敲除SIRT6基因，确定敲除靶点位置为SIRT6基因的第一外显子和第二外显子，分别构建第一个显子，第二外显子的SIRT6-小向导RNA（sgRNA），将SIRT6-sgRNA连接到有Cas9的质粒CD513B上后转染A549细胞，加入嘌呤霉素筛选出转染成功的细胞，通过无限稀释法筛选出SIRT6敲除基因的A549细胞系，蛋白印迹法检测细胞SIRT6蛋白表达情况。结果 A549细胞的感染荧光效率接近100%，蛋白质印迹法检测过表达SIRT6基因A549细胞的SIRT6蛋白呈高表达。DNA测序检测敲除SIRT6基因A549细胞系有移码突变，蛋白质印迹法检测无SIRT6蛋白表达。结论 成功构建过表达和敲除SIRT6基因质粒，并筛选出过表达和敲除SIRT6基因的稳定肺癌A549细胞株。