目的 探讨观察益髓灸对D-半乳糖衰老小鼠海马组织Klotho、胰岛素受体底物-1（IRS-1）、蛋白激酶B(Akt)、叉头框蛋白O3(FOXO3a)mRNA及蛋白表达的影响。方法 将60只雄性昆明小鼠随机分为生理盐水组、模型组、足三里组、百会组、非穴位组，每组12只。模型组和各干预组小鼠给予D-半乳糖皮下注射建立衰老小鼠模型，生理盐水组注射等量的生理盐水。3个干预组于造模第13天开始于相应穴位进行艾灸，生理盐水组、模型组仅给予同等程度的捉抓。造模前后采用Morris水迷宫实验对5组小鼠进行行为测试。治疗结束后检测小鼠海马组织Klotho、IRS-1、Akt、FOXO3a mRNA及蛋白水平。结果 （1）造模后，模型组潜伏期较生理盐水组、百会组、足三里组延长（P＜0.05），非穴位组潜伏期与百会组、足三里组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）与生理盐水组比较，模型组、非穴位组Klotho、IRS-1 mRNA及蛋白表达水平降低，Akt1、FOXO3a mRNA表达水平增高（P＜0.05）；与模型组比较，足三里组及百会组Klotho、IRS-1 mRNA表达水平增高，Akt1、FOXO3a mRNA表达水平降低（P＜0.05）。（3）与生理盐水组比较，模型组海马组织Klotho、磷酸化IRS-1（p-IRS-1）、Akt、FOXO3a 蛋白水平降低（P＜0.05），IRS-1、磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化FOXO3a（p-FOXO3a）蛋白水平升高（P＜0.05）；与模型组比较，足三里组及百会组Klotho、p-IRS-1、Akt、FOXO3a蛋白水平升高（P＜0.05），IRS-1、p-Akt、p-FOXO3a蛋白水平降低（P＜0.05），而非穴位组p-Akt蛋白表达水平降低（P＜0.05）。结论 益髓灸的早期干预可能通过上调Klotho、IRS-1 mRNA水平，促进D-半乳糖衰老小鼠海马Klotho蛋白表达，激活IRS-1的丝氨酸抑制性位点，负性调控下游的Akt活性而下调其底物FOXO3a的磷酸化表达，从而发挥延缓脑衰老的作用。