目的 探讨脑脊液细菌16S 核糖体RNA（16S rRNA）基因检测在抗生素治疗后化脓性脑膜炎患儿中的应用价值。方法 选择化脓性脑膜炎患儿60例，在抗生素使用早期及后期采集脑脊液标本，同时进行16S rRNA基因检测及细菌培养，比较两种方法的检测阳性率，分析抗生素应用时间对两种检测方法结果的影响。结果 脑脊液16S rRNA基因检测阳性21例（35.0%），脑脊液细菌培养阳性9例（15.0%），16S rRNA基因检测阳性率高于细菌培养（P＜0.05）。抗生素应用早期16S rRNA基因检测阳性率略高于抗生素应用后期，但差异无统计学意义（P＞0.05）；抗生素应用早期脑脊液细菌培养检测阳性率高于抗生素应用后期（P＜0.05）。结论 对于抗生素治疗后化脓性脑膜炎患儿，脑脊液16S rRNA基因检出阳性率高于脑脊液细菌培养，且可能更少受抗生素应用时间的影响。