目的 构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为标记的原核表达载体,并观察EGFP基因在大肠杆菌中的表达情况。方法 据已知的EGFP基因序列,设计引物,并引入NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点。采用PCR技术从含有EGFP的质粒pEGFP-C1中克隆EGFP编码序列;将其亚克隆入表达载体pTW IN1,得到以EGFP为标记的原核表达载体pTW IN-EGFP。转化大肠杆菌ER2566菌株,IPTG诱导EGFP基因表达。结果 经过IPTG诱导后,细菌培养物在长波紫外线的照射下,发出明亮的绿色荧光。结论 成功构建了原核表达载体pTW IN-EGFP,为应用EGFP作为报告基因和筛选标记奠定了实验基础。