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论著·基础研究 | 更新时间:2015-11-12
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活性氧在转化生长因子-β1刺激血管平滑肌细胞产生基质金属蛋白酶9中的作用研究

广西医学 2015第37卷09期 页码:1222-1225

作者机构:湖北省襄阳市中心医院心胸外科;武汉大学人民医院心血管外科

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DOI:10.11675/j.issn.0253-4304.2015.09.05

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目的 探讨活性氧在转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激血管平滑肌细胞(VSMC)产生基质金属蛋白酶9(MMP9)中的作用。方法 取一批原代培养大鼠主动脉VSMC分为6组,分别按0、5、0、0.05、0.5、5 mmol/L给予抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预干预细胞1 h,再用不同浓度TGF-β1(0、0、10、10、10、10 ng/ml)作用24 h,明胶酶谱法检测培养基上清中MMP的活性,裂解细胞蛋白质印迹检测细胞中MMP9的表达。另取一批VSMC原位装载2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐荧光探针,分为两组,A组予TGF-β1(10 ng/ml)干预,B组予NAC(5 mmol/L)预作用1 h后再予10 ng/ml TGF-β1干预,倒置荧光显微镜观察细胞内荧光强度。最后取一批VSMC分为6组:(1)对照组;(2)0.1 mmol/L过氧化氢(H2O2)组;(3)1 mmol/L H2O2组;(4)5 mmol/L NAC组;(5)5 mmol/L NAC+1 mmol/L H2O2组;(6)5 mmol/L NAC+1 mmol/L H2O2+10 ng/ml TGF-β1 组。分别作用24 h后检测培养基上清中蛋白酶的活性和细胞中MMP9的表达。结果 NAC显著抑制VSMC在TGF-β1作用下MMP9的表达。TGF-β1作用30 min及60 min后细胞内荧光强度明显增加;而NAC预作用后荧光强度明显减弱。1 mmol/L H2O2使VSMC表达MMP9显著增高,NAC显著抑制这种作用。结论 活性氧参与TGF-β1刺激VSMC表达的MMP9的过程。

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