目的 对大鼠抑癌基因Mob1a进行基因扩增,体外表达载体构建并且体外表达,为了进一步研究大鼠癌症发生分子机制提供支持。方法 采用RNA提取技术获得总RNA后,进行体外反转得到c DNA。利用依据大鼠Mob1a基因序列设计合成的一对特异性引物,以大鼠c DNA为模板,RT-PCR扩增得到了预期大小的DNA片段。利用NheⅠ和HindⅢ限制性酶切位点将该目的 DNA片段与p CDNA3.1-HA载体酶切后进行连接。转染HEK293T细胞系,获得总蛋白后通过Western Blot分析检测该基因在体外是否成功表达。结果 通过RT-PCR方法扩增了Mob1a基因,并且将该基因克隆至p CDNA3.1-HA。Western Blot分析显示Mob1a-HA融合蛋白在体外表达。结论 成功克隆了Mob1a基因并且成功在体外表达该蛋白。