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论著·基础研究 | 更新时间:2015-05-19
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一种简单的原代神经元培养及转染方法

广西医学 2015第37卷03期 页码:289-291

作者机构:广西卫生职业技术学院临床医学教研室;中南大学湘雅医院儿科

基金信息:【基金】 国家自然科学基金(81171226,81100846) ;湖南省博士后科研资助专项计划(2014RS4007)

DOI:10.11675/j.issn.0253-4304.2015.03.01

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目的 建立一种简单、高效、稳定的原代神经元培养及转染方法。方法 无菌条件下分离生后2 d内SD大鼠海马,经消化、反复沉淀后获得海马组织细胞悬液,利用差速贴壁法对神经元进行纯化,采用神经元专用无血清培基进行培养,并于倒置显微镜下观察神经元形态的变化, 采用微管相关蛋白(MAP2)抗体对细胞进行鉴定;利用慢病毒转染神经元,观察神经元转染效率。结果 体外培养的原代神经元,在培养第10~15天可以形成密集的神经元网络,细胞健壮,神经元特征明显;经MAP2鉴定,神经元纯度达95%以上;利用慢病毒转染神经元,转染效率达95%以上。结论 采用该方法进行原代神经元培养,能够获得高纯度的原代神经元;慢病毒是神经元转染的理想载体。

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