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论著 | 更新时间:2015-07-22
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IGF-Ⅱ基因RNAi慢病毒载体构建与稳定转染细胞株建立

广西医学 2012第34卷06期 页码:677-680

作者机构:广西医科大学第一附属医院内分泌科

基金信息:【基金】 中华医学会内分泌学分会边远地区基金项目(CSE2009009)

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目的 构建人的IGF-Ⅱ基因RNA干扰慢病毒载体并建立人肾上腺皮质瘤细胞株SW-13稳定转染细胞株。方法 根据人的IGF-Ⅱ基因序列,设计3条针对IGF-Ⅱ-shRNA序列,分别构建pLLU2G-shIGF-Ⅱ3个慢病毒载体。筛选出最有效沉默靶基因的shRNA后,将携带目的序列的慢病毒载体转染到293FT细胞中,感染人肾上腺皮质瘤细胞株SW-13,建立稳定转染细胞株。结果 设计的针对IGF-Ⅱ的序列中第3条的抑制效果最好,下调80%。以此目的序列构建稳定转染细胞株,对IGF-ⅡmRNA抑制率达95%。结论 成功构建表达人肾上腺皮质瘤IGF-Ⅱ-shRNA的慢病毒载体,它能有效沉默IGF-Ⅱ基因在人肾上腺皮质瘤细胞株SW-13中的表达并建立稳定转染细胞株。

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